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中药制剂的鉴别七、八
发布时间：2025/4/7 浏览次数：22
核心能力七 能运用高效液相色谱法进行中药制剂的鉴别
一 、核心概念 高效液相色谱鉴别法 以待测成分的保留时间作为鉴定依据。在同一色谱条件下，将供试品溶液和对照品溶液分别注入高效液相色谱仪中，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰，从而对样品进行定性鉴别。 二、学习目标 能熟练使用高效液相色谱法进行中药制剂的鉴别。 三 、基本知识 高效液相色谱法不受样品挥发性、热稳定性等限制，流动相、固定相可选择的种类较多，检 测手段多样，加之高效快速、可进行微量分析、自动化程度高，应用范围比气相色谱法广泛。目前中药制剂质量标准中，高效液相色谱法用于鉴别的品种正在逐渐增多。例如，七叶神安片中人参皂苷的鉴别，七味榼藤子丸中蔓荆子黄素的鉴别，三七通舒胶囊中人参皂苷和三七总皂苷的鉴别，三宝胶囊中原儿茶醛的鉴别，小儿热速清口服液中黄芩苷的鉴别，牛黄上清丸中黄芩 苷、栀子苷、连翘酯苷、芍药苷的鉴别，芩暴红止咳颗粒中紫丁香苷的鉴别等。 四 、能力训练 (一)操作用物 高效液相色谱仪、十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(C18)、微孔滤膜(0.45μm)、紫外检测器、色谱工作站等。 (二)注意事项 (1)进样前，色谱柱应用流动相充分冲洗平衡，待压力基线稳定后方可进样。 (2)流动相需经脱气用微孔滤膜(0.45μm) 过滤，才可使用，打开冲洗键进行泵排气。 (3)测试溶液需用微孔滤膜(0.45μm) 过滤。 (4)使用键合硅胶柱，流动相的pH 应控制在2~8,否则色谱柱易损坏。 (5)操作完毕，应先后用水和甲醇充分冲洗液路系统，尤其是使用了含盐的流动相，更应充分冲洗。 (三)操作内容
序 号
操作步骤
操 作 要 点
1
操作准备
实训用品准备
2
操作
(1)开机前准备：根据需要选择合适的色谱柱，在容器中放入已过滤脱气的流动相，把吸滤头放入容器中
(2)开机：打开仪器的电源开关，仪器自检通过后，打开色谱工作站
(3)设置仪器参数
(4)样品分析与数据采集：待色谱柱平衡，基线稳定后，设置好检测条件，开始样品分析与数据采集
(5)报告输出
(6)关机：冲洗色谱柱，排出流路中可能存有的缓冲液，并用水冲洗泵的柱塞杆；泵停止，退出工作站，关闭仪器电源
3
记录
记录仪器型号、色谱柱类型和规格、流动相流速、检测波长、放大器灵敏 度及衰减、进样量、色谱图及相关数据等
4
结果判定
比较供试品与对照品色谱图，供试品呈现与对照品保留时间相同的色谱峰，则判断为符合药品标准规定
(四)常见问题与解答 问题情境 使用高效液相色谱仪时如何保护色谱分离柱? 解答：(1)加保护柱(预柱)是保护分离柱的有效办法。保护柱是内装填料与分离柱性质相近的短柱，接在分离柱之前，或代替流路过滤器。保护柱的作用是收集和拦截分离柱口的化学垃圾，这些垃圾如果直接进入分离柱会逐渐堆积在柱头，最终降低柱效能。保护柱是消耗品。 (2)避免高压冲击分离柱。一般色谱柱都能承受高压，但经不住突然变化的高压冲击，这将 改变柱床体积，影响柱效。引起高压冲击的原因主要有进样器样品阀的缓慢转动、启动太快、柱切换等操作。用手动进样阀时压力变化不大，而自动进样阀由于切换较慢，会造成压力冲击。 (3)合理选择分离柱。选择色谱分离柱主要根据两点：一是根据待测组分分子量的大小。二是根据流动相条件，包括pH、离子强度和溶剂极性等。 (4)定期冲洗分离柱。每次分析工作结束时，冲洗完缓冲盐，然后过渡到用强溶剂冲洗柱子，如可用色谱纯甲醇、乙腈冲洗反相C18柱，目的是冲去吸附在柱上的强保留组分。如果用甲醇-水为流动相也应这样冲洗柱子，一定程度上可恢复柱效。 核心能力八 能运用气相色谱法进行中药制剂的鉴别
一、核心概念 1. 气相色谱鉴别法 以待测成分的保留时间作为鉴定依据的一种鉴别方法。在同一色谱条件下，将供试品溶液和对照品溶液分别注入气相色谱仪中，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰，从而对样品进行定性鉴别。 2.系统适用性试验 为了保证检测结果的准确性，在采用气相色谱法测定时，需进行系统 适用性试验。色谱系统的适用性试验参数通常包括理论板数、分离度、灵敏度、重复性和拖尾因子。 二、学习目标 能熟练使用气相色谱法进行中药制剂的鉴别。 三 、基本知识 气相色谱法是以待测成分的保留时间作为鉴定依据的一种鉴别方法，具有高分辨率、高灵敏度、快速、准确等特点，尤其适合中药制剂中挥发性成分的鉴别，如麝香酮、薄荷醇、冰片、水杨 酸甲酯等。中药制剂中西瓜霜润喉片中冰片的鉴别、安宫牛黄丸中麝香酮的鉴别、藿香正气水 中紫苏烯和紫苏醛的鉴别等可采用此法。 四 、能力训练 (一)操作用物 气相色谱仪：载气源(氢气、氮气或氦气作为载气)、进样系统、色谱柱(填充柱或毛细管柱)、 柱温箱、检测器(氢火焰离子化检测器、电子捕获检测器等)、温度控制系统、数据处理系统等。 (二)注意事项 (1)先通载气，确保管路无泄漏并使载气通过检测器后，才可打开各部分电源开关，设置气 化室、柱温箱和检测器温度，开始加热。进样口温度应高于柱温30～50℃,检测器温度一般高 于柱温，并不得低于150℃,以免水汽凝结，通常为250～350℃。 (2)气化室、柱温箱和检测器温度恒定后，若选用氢火焰离子化检测器，可开启氢气钢瓶和 空气压缩机，调节载气流速或流量，按下点火按钮，点燃氢气。 (3)调节放大器灵敏度，待基线稳定后，进样测试。进样时，注射器操作应快速，尽量保持留 针时间的一致性，保证进样的准确性和重现性。 (4)一般色谱图应于30分钟内记录完毕。测试完毕，先关闭各加热电源以及氢气和空气开 关，待检测器和柱箱温度降至100℃以下时，关闭载气。 (5)初次测定该品种时，可先经预实验以确定仪器参数，根据预实验情况适当调节。各品种 项下规定的色谱条件，除检测器种类、固定液品种及特殊指定的色谱柱材料不得改变外，其余如 色谱柱内径和长度、载体牌号和粒度、固定液涂布浓度、载气流速、柱温、进样量、检测器的灵敏 度等，均可适当改变，以适应具体品种并符合系统适用性试验的要求。 (三)操作内容
问题情境 使用气相色谱仪时，对于载气钢瓶，如果管理、操作不当会有极大的安全隐患。实际工作中应注意哪些问题? 解答：(1)钢瓶必须定期送有关部门检验，检验合格的钢瓶才能充气。充一般气体的钢瓶3年内必须送检1次，充腐蚀性气体的钢瓶每2年送检1次。 (2)搬运钢瓶时，要戴好钢瓶帽和上、下两个橡皮腰圈，轻拿轻放，严禁在地上滚动、撞击、摔倒或激烈振动，以防发生爆炸。放置和使用钢瓶时，必须用架子或铁丝固定。 (3)钢瓶应存放在阴凉、干燥、远离热源的地方，通风良好，避免明火和阳光暴晒。钢瓶受热后，气体膨胀，瓶内压力增大，易造成漏气，甚至爆炸。可燃性气体钢瓶与氧气钢瓶必须分室存放。氢气钢瓶最好放置在大楼外的专用小间，以确保安全。 (4)使用钢瓶时，除二氧化碳、氨气外，一般要用减压阀。各种减压阀中，除氮气和氧气的减压阀可相互通用外，其他的只能用于规定的气体，以防爆炸。安装减压阀时必须仔细旋妥，通常旋进7圈螺纹(俗称吃7牙)。易发生聚合反应的气体(如乙炔、乙烯)必须规定贮存期限，避免久贮。 (5)可燃性气体，如氢气、乙炔等，钢瓶的阀门是“反扣”(左旋)螺纹，即逆时针方向拧紧；非燃性或助燃性气体，如氧气、氮气等，钢瓶的阀门是“正扣”(右旋)螺纹，即顺时针拧紧。 (6)绝不可将油、脂或其他易燃物、有机物沾在氧气钢瓶上，特别是阀门嘴及减压阀处，也不得用棉、麻等物堵漏，以防燃烧引起事故。 (7)要注意保护好钢瓶阀门。开关阀门时，首先弄清方向，再缓慢旋转，否则会使螺纹受损。开启阀门时，人应站在减压阀的另一侧，以防减压阀冲出被击伤，每次用后应完全关闭阀门。 (8)贮存可燃性气体的钢瓶要有防回火装置。有的减压阀已有此装置，也可在气体导管中填装细铁丝网以防止回火，在导气管路中加接液封装置也可有效地起到保护作用。 (9)不得将钢瓶内的气体全部用完，一定要保留0.05 MPa以上的残余压力(减压阀表压)。可燃性气体(如乙炔)应剩余0.2～0.3 MPa, 氢气应保留2 MPa, 以防重新充气时发生危险。钢瓶要随用随关，勤检查。 (10)一旦发生阀门漏气，应立即将钢瓶移至室外，以防在室内发生事故。
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